课堂 | 大脑研究：样本形态和基因表达之间的相互关系

高单个神经元切割

实现基因表达的可靠分析

帕金森症是一种常见的进行性中枢神经系统退行性疾病，它与黑质中释放多巴胺的神经元细胞死亡有关。受疾病感染的多巴胺释放神经元与健康神经元在基因表达谱上存在差异，而这种差异有助于确定治疗的靶基因。

对于基因表达分析来说，研究整体组织是徒劳无意义的，单细胞分辨率才是关键。如果分析多巴胺释放神经元与所有其他脑细胞的混合物，会影响研究结果。

采用徕卡的激光显微切割 (LMD) 方法能够特异地从帕金森症患者尸检组织中分离单个多巴胺能神经元，从而进行分析，消除因检测不均质细胞群体造成的误判。

研究领域

•    阿尔茨海默症

•    发育生物学

•    衰老

•    肿瘤组织的突变分析

•    其他疾病

参考文献

•    Casli et al., Neuroscience, 2016

•    Schlaudraff et al., Neurobiology of Aging, 2014, 35 (10)

•    Bandyopadhyay et al., JoVE, 2014, 83

•    Gründemann et al., NAR, 2008, 36 (7)

•    Ramirez et al., Nature Genetics, 2006, 38

单细胞精度的基因表达分析工作流程

样本制备

使用冷冻切片机切片，随后将制备好的切片放在特制的 LMD 载玻片上。

固定和染色

将组织固定并染色，用于后续显微成像和激光显微切割。可使用染色仪实现自动化。

可视化和定义 ROI

自动生成样本概览。可以自动或手动轻松识别和标注感兴趣区域 (ROI)。

激光显微切割

可使用Leica LMD系统，自动切割ROI区域，并借助重力将切割下来的组织收集到 PCR管或 8 联管等标准且经济的实验室耗材之中。

基因表达分析

使用传统的 qPCR ，或者使用微阵列或下一代测序 (NGS) 等技术进行基因表达分析。

您将享受如下优势：

无接触式单细胞切割

徕卡提供的激光显微切割系统是实现单细胞高精度切割的理想之选。您可以一边观察，一边轻松切割单个细胞。无接触切割有助于防止核糖核酸酶等产生的污染。

使用徕卡显微系统提供 的LMD 系统，通过重力收集分离纯化后的物质

激光显微切割前、后的小鼠大脑冷冻切片。甲苯胺蓝染色。