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荧光显微镜激发荧光的方式有哪些?

发布时间:2021-06-29      点击次数:18
  荧光显微镜是免疫荧光细胞化学的基本工具。是由光源、滤板系统和光学系统等主要部件组成。荧光显微镜利用一定波长的光激发标本发射荧光,通过物镜和目镜系统放大以观察标本的荧光图像。细胞中有些物质,如叶绿素等,受紫外线照射后可发荧光;另有一些物质本身虽不能发荧光,但如果用荧光染料或荧光抗体染色后,经紫外线照射亦可发荧光,荧光显微镜就是对这类物质进行定性和定量研究的工具之一。
  荧光显微镜是免疫荧光组织化学的基本工具。它是由超高压光源、滤片系统(包括激发和压制滤板)、光学系统和摄影系统等主要部件组成,是利用一定波长的光激发标本发射荧光。
  荧光显微镜激发荧光的方式:按光的波长范围分为UV激发法(使用紫外线照明法)和BV激发法(使用蓝紫光)两种。
  UV激发法是用短于400nm外光进行激发。该法不存在可见的激发光,所以被观察的荧光呈现该染料固有的荧光,容易判别标本上的特异荧光和背景组织的自身荧光。
  BV激发法是以404nm、434nm为中心的由紫外至蓝光进行激发。该方法使用蓝光照射标本,所以荧光显微镜的截止滤光片必须使用可完全阻断蓝光并可充分通过所需绿、黄荧光的滤光片。用于荧光抗体法的荧光色素。对于激发光的极大吸收波长和荧光的极大发光波长比较接近,所以BV激发法使用的滤光片必须使用锐截止式滤光片。该法可用蓝光作为激发光,所以荧光色素的吸收效率较高,可得到较明亮的图像。其缺点是500nm以下的荧光无法看到,而500nm以上的使整个图像显黄色。在荧光抗体法中,大多以荧光色素特有的颜色来判断其特异性,所以在讨论微妙的特异性时,上述BV激发法的缺点往往影响大。
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