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荧光显微镜激发荧光的方式有哪些?

更新时间:2021-06-29      点击次数:436
  荧光显微镜是免疫荧光细胞化学的基本工具。是由光源、滤板系统和光学系统等主要部件组成。荧光显微镜利用一定波长的光激发标本发射荧光,通过物镜和目镜系统放大以观察标本的荧光图像。细胞中有些物质,如叶绿素等,受紫外线照射后可发荧光;另有一些物质本身虽不能发荧光,但如果用荧光染料或荧光抗体染色后,经紫外线照射亦可发荧光,荧光显微镜就是对这类物质进行定性和定量研究的工具之一。
  荧光显微镜是免疫荧光组织化学的基本工具。它是由超高压光源、滤片系统(包括激发和压制滤板)、光学系统和摄影系统等主要部件组成,是利用一定波长的光激发标本发射荧光。
  荧光显微镜激发荧光的方式:按光的波长范围分为UV激发法(使用紫外线照明法)和BV激发法(使用蓝紫光)两种。
  UV激发法是用短于400nm外光进行激发。该法不存在可见的激发光,所以被观察的荧光呈现该染料固有的荧光,容易判别标本上的特异荧光和背景组织的自身荧光。
  BV激发法是以404nm、434nm为中心的由紫外至蓝光进行激发。该方法使用蓝光照射标本,所以荧光显微镜的截止滤光片必须使用可*阻断蓝光并可充分通过所需绿、黄荧光的滤光片。用于荧光抗体法的荧光色素。对于激发光的极大吸收波长和荧光的极大发光波长比较接近,所以BV激发法使用的滤光片必须使用锐截止式滤光片。该法可用蓝光作为激发光,所以荧光色素的吸收效率较高,可得到较明亮的图像。其缺点是500nm以下的荧光无法看到,而500nm以上的使整个图像显黄色。在荧光抗体法中,大多以荧光色素*的颜色来判断其特异性,所以在讨论微妙的特异性时,上述BV激发法的缺点往往影响大。
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