采用徕卡THUNDER-DM6B观察宿主细胞及其复制过程

病毒可以借助几种显微镜技术进行研究。根据显微镜的放大倍数和分辨率，可以在组织水平、细胞水平或病毒粒子水平进行观察（图1）。通常，病毒粒子本身只能通过电子显微镜或超分辨显微镜来分辨。在细胞水平上，病毒大多借助先进的宽场荧光或共焦显微镜进行观察。在组织中，明场显微镜或基本的宽场荧光显微镜足以用于病毒研究。但是显微技术的鉴别并不是严格的。

徕卡的THUNDER实时成像（WO2019 /185174 A1）可以帮助提高背景信噪比，减少离焦模糊。相关的对比度增强可以揭示显微图像中的附加信息。

在测序技术、生物信息学和电子显微镜中，Ogando等人通过荧光显微镜分析了感染细胞：VeroE6细胞生长在玻璃盖玻片上，感染SARS-CoV-2，并用多聚甲醛固定。然后，用事先暴露于SARS-CoV的兔子或小鼠的抗血清孵育细胞（图2）。用荧光标示的二级抗体检测与VeroE6细胞SARS-CoV-2结构结合的SARS-CoV源性抗体。此外，细胞核用Hoechst染色。用DM6 B正置荧光显微镜进行荧光成像。 

免疫荧光显微镜显示，许多SARS-CoV抗血清在SARS-CoV-2感染细胞（病毒蛋白nsp3、nsp4、nsp5、nsp8、nsp9、nsp13、nsp15、N、M）中具有交叉反应性。这一事实意味着，针对SARS-CoV产生的抗血清也导致SARS-CoV-2感染细胞的特征性荧光染色（图3）。nsps出现在感染细胞的核周区，而N蛋白则分布在胞浆中。在高尔基体中检测到M蛋白。

Ogando等人的研究中描述的交叉反应抗血清将是特征性SARS-CoV-2复制周期的实用工具。这个工具反过来能使研究人员能够确定复制抑制剂的潜在目标。

一个相对简单的实验装置-免疫荧光显微镜-足以得出病毒复制周期的结论。因为在这种方法中细胞生长在盖玻片上，并安装在玻片上，所以正置荧光显微镜是一种实用的解决方案。配备有电动载物台和采用宽视野（FOV）的自动化扫片模块帮助用户快速获取全玻片的图像概览。如果单视野快拍就能满足需求，则机械式载物台是更合理的选择。

图为THUNDER DM6B实时自动扫描的小鼠视网膜组织。

（左侧为普通DM6B的宽场荧光成像，右侧为THUNDER DM6B的荧光成像）