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摘要
显微CT在生物软组织成像中常面临对比度不足的问题，临界点干燥是提升图像质量的关键前处理步骤。本文系统介绍该技术的操作流程，并结合昆虫肌肉、脑部及幼虫器官三大案例，为相关领域研究者提供可复用的实验方案。
显微CT成像的挑战与突破
传统的显微CT成像对骨骼、牙齿等高密度结构表现出色，但对于软组织结构，由于低原子序数元素的弱吸收特性，成像对比度常不理想。临界点干燥技术通过温和去除样本中的液体，最大程度减少组织收缩与变形，显著提升信噪比，是获取高质量三维重建数据的必备步骤。
三大案例展示临界点干燥的实际应用
案例一：书蝎肌肉系统显微CT成像方法
样本类型
物种：书蝎（Neobisium sp.）
目标：肌肉系统三维结构可视化
Courtesy of Elisabeth Lipke and Dr. Peter Michalik, University of Greifswald, Germany.
推荐标准化实验流程
（基于Leica EM CPD300）
1
样本装载
使用微孔样本罐，置于“滤片与多孔罐支架”中。
2
固定与脱水
70% 乙醇中固定，过夜
乙醇梯度脱水：
✫ 80% 乙醇，10分钟
✫ 90% 乙醇，10分钟
✫ 96% 乙醇，10分钟
✫ 100% 乙醇，2次，每次10分钟
3
染色
使用1% 碘乙醇溶液（溶于100%乙醇）过夜染色
100% 乙醇冲洗2次，每次10分钟
4
临界点干燥
使用Leica EM CPD300全自动程序处理
5
扫描
干燥样本粘附于样品台上
使用X射线显微CT系统扫描
案例二：苍蝇脑部神经结构显微CT成像方法
样本类型
物种：绿头苍蝇（Lucilia caesar）
目标：脑部神经解剖结构三维重建
Courtesy of Elisabeth Lipke and Dr. Peter Michalik, University of Greifswald, Germany.
推荐标准化实验流程
（基于Leica EM CPD300）
1
样本装载
样本单独放置于“节肢动物支架”的腔室中。
2
固定与脱水
Bouin固定液过夜固定
0.1 M磷酸缓冲液（含1.8%蔗糖，pH 7.2）冲洗3次，每次10分钟
乙醇梯度脱水：
✫ 60%、70%、80%、90%、96%、100%乙醇，每步10分钟
✫ 100%乙醇重复2次
3
染色
1% 碘乙醇溶液过夜染色
100% 乙醇冲洗2次，每次10分钟
4
临界点干燥
使用Leica EM CPD300全自动程序处理
5
扫描
干燥样本粘附于样品台上
使用X射线显微CT系统进行高分辨率扫描
案例三：红血虫幼虫器官系统显微CT成像方法
样本类型
物种：摇蚊幼虫（红血虫）
目标：幼虫内部器官系统三维重建
Courtesy of Elisabeth Lipke and Dr. Peter Michalik, University of Greifswald, Germany.
推荐标准化实验流程
（基于Leica EM CPD300）
1
样本装载
样本单独放置于“节肢动物支架”腔室中。
2
固定与脱水
2.5% 戊二醛（溶于0.1 M磷酸缓冲液）过夜固定
0.1 M磷酸缓冲液（含1.8%蔗糖，pH 7.2）冲洗3次，每次10分钟
乙醇梯度脱水：
✫ 60%、70%、80%、90%、96%、100%乙醇，每步10分钟
✫ 100%乙醇重复2次
3
染色
1% 碘乙醇溶液过夜染色
100% 乙醇冲洗2次，每次10分钟
4
临界点干燥
使用Leica EM CPD300全自动程序处理
5
扫描
干燥样本粘附于样品台上
使用X射线显微CT系统扫描
技术总结
以上三种方法均采用：
标准化乙醇梯度脱水
碘乙醇染色增强对比
Leica EM CPD300全自动干燥
显微CT系统扫描
流程可根据样本硬度、大小与结构复杂度进行微调，适用于绝大多数昆虫及软体生物样本的显微CT前处理。
仪器推荐：Leica EM CPD300
全自动操作，温控精准，样本放进去就不用管了，简直是实验室的“干燥神器”！
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