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讲述共聚焦显微镜TCS SP8的操作步骤

发布日期: 2018-10-19
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     共聚焦显微镜TCS SP8包括LED光源、旋转多针孔盘、带有压电驱动器的物镜和CCD相机。LED源通过多针孔盘(MPD)和物镜聚焦到样品表面上,从而反射光。反射光通过MPD的针孔减小到聚焦的部分,这落在CCD相机上。来自传统光学显微镜的图像包含清晰和模糊的细节。相反,在共焦图像中,通过多针孔盘的操作滤除模糊细节(未聚焦)。只有来自焦平面的光到达CCD相机。因此,共聚焦显微镜能够在纳米范围内获得高分辨率。每个共焦图像是通过样品的形貌的水平切片。在不同的焦点高度捕获图像产生这样的图像的堆叠,通过共焦显微镜通过压电驱动器通过物镜的垂直位移来实现。200到400个共焦图像通常在几秒内被捕获,之后软件从共焦图像的堆栈重建的三维高度图像。
    共聚焦显微镜TCS SP8的操作步骤:
     1.开启仪器电源及光源:一般先开启显微镜和激光器,再启动计算机,然后启动操作软件,设置荧光样品的激发光波长,选择相应的滤光镜组块。以便光电倍增管(photo multiplier tube,PMT)检测器能得到足够的信号结果。使用汞灯的注意事项同普通荧光显微镜。
     2.设置相应的扫描方式:在目视模式下.调整所用物镜放大倍数,在荧光显微镜下找到需要检测的细胞。切换到扫描模式,调整双孔针和激光强度参数,即可得到清晰的共聚焦图像。
     3.获取图像:选择合适的图像分辨率,将样品完整扫描后,保存图像结果即可。
     4.关闭仪器:仪器测定样品结束后,先关闭激光器部分,计算机仍可继续进行图像和数据处理。若要退出整个共聚焦显微镜TCS SP8系统,则应该在激光器关闭后,待其冷却至少10分钟后再关闭计算机及总开关。
    共聚焦显微镜TCS SP8是一项高分辨率三维光学成像技术,主要特点在于其光学分层能力,即获得特定深度下焦点内的图像,图像通过逐点采集,以及之后的计算机重构而成,因此它可以重建拓扑结构复杂的物体。
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