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介绍徕卡荧光显微镜的灯泡调中和荧光观察

发布日期: 2019-02-20
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     徕卡荧光显微镜是由生物显微镜和落射荧光装置组成,广泛应用于生物学、医学、免疫学、肿瘤学、遗传学、材料科学等领域。配有消杂散光系统,将强烈的杂光导入至物镜光路之外,并加以吸收,大大提高了徕卡荧光显微镜的图像信噪比。
    一、灯泡调中:
    (1)任选一块标本放在载物台上;
    (2)转动镜臂上的聚光镜旋钮使聚光镜移出光路,转动滤色片组转换手轮,将紫光(V)或蓝光(B)或绿光(G)激发滤色片组转入光路,并将10X荧光物镜转入光路;
    (3)调节粗微调手轮,将标本像调焦清晰;
    (4)前后推动垂直照明器右边的聚光镜调焦推杆,使视场光栏成像清晰,转动视场光栏拨杆将视场光栏收小,调节视场光栏调中螺钉使视场光栏居中,然后再将视场光栏开至较大;
    (5)转动镜臂上的聚光镜旋钮使聚光镜移入光路,前后调节灯箱上的聚光镜拨杆,使汞灯的弧光在视场内成像清晰;
    (6)调整灯箱上的灯泡水平调节螺钉和垂直调节螺钉,使汞灯的弧光居中;
    (7)调整反光镜水平调节螺钉和垂直调节螺钉,使光源的反射像与汞灯的弧光分开;
    (8)转动聚光镜旋钮把聚光镜移出光路,此时视场照明均匀。
 
    二、荧光观察:
    (1)将荧光染色标本放到载物台上。
    (2)将10X平场物镜或40X荧光物镜转入光路,调节载物台纵横移动手轮,将标本移入光路。
    (3)转动滤光片转换拨轮,将荧光染色标本所需要的激发滤光片组转入光路。激发滤光片组编号刻在滤片组转换拨轮上。滤光片选择正确与否,是徕卡荧光显微镜能否得到正确应用的关键。选用滤光片时,必须遵守斯托克斯定律:激发滤光片的透射波长<双色束分离器的透射波长<阻断滤光片的透射波长。由于激发滤光片、双色束分离器和阻断滤光片,出厂时已按其用途和本身的光学特性进行了严格的组合匹配,在观察和摄影时,只需选择滤光片组即可。
    (4)调节粗调手轮,当看清荧光图像轮廓后,再用微调手轮调焦,直至看到清晰的荧光图像。
    (5)当需要得到较强的荧光图像时,可转动聚光镜旋钮把聚光镜移入光路,可获得较明亮的荧光图像。
    (6)当需要使用40X或100X荧光物镜观察时,应在标本和物镜间加上甘油,油中不能有影响观察的小泡或杂质。使用时可使甘油慢慢浸润一会儿,然后轻轻左右来回转动物镜转换器以排除气泡。
     徕卡荧光显微镜对于物质的检出能力是非常高的,具有放大的作用;而且对于被检测物质的细胞的刺激也是非常小的,可以检测活体的染色体;还有就是可以进行多个步骤的染色。对于荧光素的构造观察是非常好的,一般的显微镜是看不出来的。而且对于一些物质是否有荧光,荧光是什么色调的进行判断,还能看出是不是抗体的荧光。此款显微镜对于物体的定性、定量分析都是可以测定的。
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