说说荧光显微镜的成像技术

　　荧光显微镜用于研究细胞内物质的吸收、运输、化学物质的分布及定位等。细胞中有些物质，如叶绿素等，受紫外线照射后可发荧光；另有一些物质本身虽不能发荧光，但如果用荧光染料或荧光抗体染色后，经紫外线照射亦可发荧光，荧光显微镜就是对这类物质进行定性和定量研究的工具之一。

　　荧光显微镜技术包括免疫荧光技术和荧光素直接标记技术。例如，将标记荧光素的纯化肌动蛋白显微注射入培养细胞中，可以看到肌动蛋白分子组装成肌动蛋白纤维。可将产生荧光的绿色荧光蛋白基因与某种蛋白质基因融合，在表达这种融合蛋白的细胞中，便可直接在活体状态下观察到该蛋白在活细胞内的动态变化。不同荧光素的激发波长范围不同，所以同一样品可以用两种以上的荧光素标记，同时显示不同成分在细胞中的定位。

　　还有一种反卷积处理技术，是一种应用于沿光学（Z）轴获取的一组全聚焦图像的算法，以增强对于给定图像平面或多个焦平面图像叠加中的光子信号。显微镜必须配备高精度的电动聚焦驱动器，以保证在样品的焦平面之间以精确定义的间隔进行图像采集。在一个典型的应用中，反卷积处理被用于去模糊以及从*焦平面上去除使用宽场荧光激发和发射聚焦外的光。反卷积过程是将焦平面上方和下方发射的光子产生的“模糊”强度重新分配给原始平面。因此，反卷积几乎使用了所有可用的发射强度，并提供了较佳的光预算，从而使这项技术成为非常光敏的样品的选择方法。