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说说荧光显微镜的成像技术

更新时间:2020-03-13      点击次数:818
  荧光显微镜用于研究细胞内物质的吸收、运输、化学物质的分布及定位等。细胞中有些物质,如叶绿素等,受紫外线照射后可发荧光;另有一些物质本身虽不能发荧光,但如果用荧光染料或荧光抗体染色后,经紫外线照射亦可发荧光,荧光显微镜就是对这类物质进行定性和定量研究的工具之一。
  荧光显微镜技术包括免疫荧光技术和荧光素直接标记技术。例如,将标记荧光素的纯化肌动蛋白显微注射入培养细胞中,可以看到肌动蛋白分子组装成肌动蛋白纤维。可将产生荧光的绿色荧光蛋白基因与某种蛋白质基因融合,在表达这种融合蛋白的细胞中,便可直接在活体状态下观察到该蛋白在活细胞内的动态变化。不同荧光素的激发波长范围不同,所以同一样品可以用两种以上的荧光素标记,同时显示不同成分在细胞中的定位。
  还有一种反卷积处理技术,是一种应用于沿光学(Z)轴获取的一组全聚焦图像的算法,以增强对于给定图像平面或多个焦平面图像叠加中的光子信号。显微镜必须配备高精度的电动聚焦驱动器,以保证在样品的焦平面之间以精确定义的间隔进行图像采集。在一个典型的应用中,反卷积处理被用于去模糊以及从*焦平面上去除使用宽场荧光激发和发射聚焦外的光。反卷积过程是将焦平面上方和下方发射的光子产生的“模糊”强度重新分配给原始平面。因此,反卷积几乎使用了所有可用的发射强度,并提供了较佳的光预算,从而使这项技术成为非常光敏的样品的选择方法。
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