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说说荧光显微镜的成像技术

发布日期: 2020-03-13
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  荧光显微镜用于研究细胞内物质的吸收、运输、化学物质的分布及定位等。细胞中有些物质,如叶绿素等,受紫外线照射后可发荧光;另有一些物质本身虽不能发荧光,但如果用荧光染料或荧光抗体染色后,经紫外线照射亦可发荧光,荧光显微镜就是对这类物质进行定性和定量研究的工具之一。
  荧光显微镜技术包括免疫荧光技术和荧光素直接标记技术。例如,将标记荧光素的纯化肌动蛋白显微注射入培养细胞中,可以看到肌动蛋白分子组装成肌动蛋白纤维。可将产生荧光的绿色荧光蛋白基因与某种蛋白质基因融合,在表达这种融合蛋白的细胞中,便可直接在活体状态下观察到该蛋白在活细胞内的动态变化。不同荧光素的激发波长范围不同,所以同一样品可以用两种以上的荧光素标记,同时显示不同成分在细胞中的定位。
  还有一种反卷积处理技术,是一种应用于沿光学(Z)轴获取的一组全聚焦图像的算法,以增强对于给定图像平面或多个焦平面图像叠加中的光子信号。显微镜必须配备高精度的电动聚焦驱动器,以保证在样品的焦平面之间以精确定义的间隔进行图像采集。在一个典型的应用中,反卷积处理被用于去模糊以及从指定焦平面上去除使用宽场荧光激发和发射聚焦外的光。反卷积过程是将焦平面上方和下方发射的光子产生的“模糊”强度重新分配给原始平面。因此,反卷积几乎使用了所有可用的发射强度,并提供了较佳的光预算,从而使这项技术成为非常光敏的样品的选择方法。
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