说一说激光显微切割的优缺点有哪些

　　激光显微切割的基本原理是通过一低能红外激光脉冲激活热塑膜———乙烯乙酸乙烯酯（ethylenevinylacetate，EVA）膜（其大吸收峰接近红外激光波长），在直视下选择性地将目标细胞或组织碎片粘到该膜上。LCM系统包括倒置显微镜、固态红外激光二极管、激光控制装置、控制显微镜载物台（固定载玻片）的操纵杆、电耦合相机及彩色显示器。用于捕获目标细胞的热塑膜直径通常为6mm，覆在透明的塑料帽上，后者恰与后继实验所用的标准0.5ml离心管相匹配。

　　激光显微切割显著的优点在于其迅速、准确和多用途的特性。结合组织结构特点以及所需的切割准确度，通过选择激光束的直径大小，可以迅速获取大量的目标细胞。LCM与以显微操作仪为基础的显微切割技术相比，具有以下优点：(1)分离细胞速度快，无需精巧的操作技能；(2)捕获细胞和剩余组织的形态学特征均保持完好，可以较好地控制捕获细胞的特异性；(2)捕获细胞与塑料帽结合紧密，减少了组织损失的风险。相比而言，除了激光切割弹射微分离系统以经染色的用于存档的切片也可被成功进行显微切割。

　　尽管LCM应用广泛，但对于常规染色、固定且不加盖玻片的组织切片，其视觉分辨率受到很大限制。而对于那些本身缺乏一定结构特点的复杂组织（如淋巴组织，广泛浸润的腺癌等），要准确分离出某一类细胞几乎是不可能的。Fend等通过采用特殊染色，尤其是免疫组化方法，使目标细胞或想要去除的细胞变得更加醒目，从而解决了上述难题。

　　应用LCM，偶尔会出现无法将选择的细胞从切片上移走的情况，出现这种结果有两种原因：(1)细胞与热塑膜之间的粘合力不足，通常是由于组织未*脱水或激光的能量设置过低造成的；(2)组织切片与载玻片间的粘合力过强，通常发生在显微切割干燥时间过长的冰冻切片。针对不同样本组织（包括免疫组化染色的组织切片），一些研究小组分别详尽报道了采用适合的处理方法，以达到显微切割条件。