细胞分子生物学的关键是制备用于生物大分子和生化学分析的细胞。在进行复杂的分子杂交等分子生物学研究中,由于非目的细胞的污染而严重影响了实验结果。从新鲜组织获得的细胞进行培养,虽可减少污染,但由于培养环境不同于组织自然生长状态,培养细胞并不能反映它们原生的基因表达方式和分子事件。激光显微切割技术是为了从多种细胞构成的组织中获得纯一细胞而逐渐发展起来的。它是20世纪90年代后期,由现代物理学和生物学相结合的精确取材技术。激光显微切割技术(Laser Microdissection,LMD)是一项借助激光显微切割仪,在显微镜下从组织切片或涂片中分离、纯化单一类型细胞群体或单个细胞的技术,具有快速、准确且操作简便的特点,该技术成功地解决了大块分离组织中的细胞功能异质性问题
11月24日15:00,徕卡显微系统联合丁香园举办「激光显微切割技术与组织区组学研究」线上分享,邀请到徕卡生命科学显微镜高级应用专家高天龙向大家介绍这项技术的原理、特性和在多个领域的应用情况。扫码即可免费预约报名!直播结束后,我们会安排发送本次直播的相关资料。
TIPS
激光显微切割的应用领域非常广泛,主要用于医院病理科、肿瘤研究、疾病病理研究、植物学、细胞生物学、中药研究、法医鉴定等领域。
1、 肿瘤研究:主要通过常规染色或是荧光染色,以石蜡或冰冻切片的方式制备,通过形态学特异性的获取肿瘤组织,制备高度单一的肿瘤样品,后期提取DNA、RNA、蛋白质等大分子物质,分别分析如基因突变(测序)、基因的表达谱(荧光定量)蛋白标志物(2D电泳、质谱、蛋白测序等)。
2、 病理研究:主要通过常规染色或是荧光染色,以石蜡或冰冻切片的方式制备,通过形态学特异性的获取特定组织或细胞,分析特定组织类型的基因表达等。如脑片的海马与皮层研究、糖尿病的病理研究、疾病的病理研究、还有一些病理诊断等。
3、 细胞生物学:特定的转基因动物或转基因细胞,通过荧光蛋白,特异性的识别转基因阳性的细胞,特定获取进行分析。
4、 植物学:利用很多植物组织有自发荧光的特性,不同的组织的自发荧光不同,分析特定组织类型的基因表达或蛋白、特定活性物质的表达。主要应用于植物病理以及生理病理机制方面的研究,如白云杉的防御机制研究、水稻共生菌研究、柑橘病理过程研究、植物染色体研究等等。
5、 法医学:获取体液标本,通过细胞涂片的方式,特异性的常规染色,特定的获取细胞、血细胞、上皮细胞等进行DNA指纹的比对。
6、 活细胞研究:通过特定的带膜培养皿,特异性的分离单细胞或细胞克隆,获取后的细胞可以进行进一步的后续培养或直接分析。
7、 中药学研究:通过激光显微切割联合液质联用进行中药质量的评价或特定组织生物活性物质的评价。评价特定组织类型的基因表达。
染色体研究:利用激光显微切割获取单条的染色体,分析单条染色体上的基因定位或单条染色体测序等。
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