荧光显微镜是免疫荧光细胞化学的基本工具。是由光源、滤板系统和光学系统等主要部件组成。荧光显微镜利用一定波长的光激发标本发射荧光,通过物镜和目镜系统放大以观察标本的荧光图像。细胞中有些物质,如叶绿素等,受紫外线照射后可发荧光;另有一些物质本身虽不能发荧光,但如果用荧光染料或荧光抗体染色后,经紫外线照射亦可发荧光,荧光显微镜就是对这类物质进行定性和定量研究的工具之一。
荧光显微镜使用注意事项:
1、严格按照荧光显微镜说明书要求进行操作,不要随意改变程序。
2、荧光显微镜应在暗室中进行检查。进入暗室后,接上电源,点燃超高压汞灯5~15min,待光源发出强光稳定后,眼睛*适应暗室,再开始观察标本。
3、防止紫外线对眼睛的损害,在调整光源时应戴上防护眼镜。
4、检查时间每次以1~2h为宜,超过90min,超高压汞灯发光强度逐渐下降,荧光减弱;标本受紫外线照射3~5min后,荧光也明显减弱;所以,Z多不得超过2~3h。
5、荧光显微镜光源寿命有限,标本应集中检查,以节省时间,保护光源。天热时,应加电扇散热降温,新换灯泡应从开始就记录使用时间。灯熄灭后欲再用时,须待灯泡充分冷却后才能点燃。一天中应避免数次点燃光源。
6、标本染色后立即观察,因时间久了荧光会逐渐减弱。若将标本放在聚乙烯塑料袋中保存,可延缓荧光减弱时间,防止封裱剂蒸发。
7、荧光亮度的判断标准:一般分为四级,即“-”表示无或可见微弱荧光。“+”表示仅能见明确可见的荧光。“++”表示可见有明亮的荧光。“+++”表示可见耀眼的荧光。