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使用显微镜观察和判读H&E染色

发布时间:2023-01-18      点击次数:217

分辨组织样本的结构,了解显微镜在病理学应用中的多种功能

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谈到显微镜在病理学家日常工作中的用处时,我们通常会想到诊断。除了病理学实验室工作流的这一阶段,显微镜在更早期的阶段也发挥着重要作用。实验室技术员或病理学家使用显微镜检查样本染色 情况


如果样本不经染色处理,在显微镜下只能看到组织切片或涂片标本的基本结构,但却无法看到进一步的细节。对于对比度不足的非常薄的切片尤其如此,有时几乎是半透明状态。


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图1:图像中所示为未染色的组织切片。没有苏木精和伊红等染色,几乎无法识别不同的细胞类型或组织结构,也就很难从图像中获取有用信息,甚至无法进行有效的诊断。

经染色处理后,样本的不同部分显示为不同的颜色和染色强度,从而使组织内的结构可见。最常见的染色组合是苏木精和伊红,简称为H&E染色

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图2:载玻片浸入不同的溶液中进行染色。


H&E染色的原理

H&E染色前,首先要对组织进行固定、脱水、包埋和切片处理,然后将切片贴到载玻片上。染色前,一般需要使用二甲苯等溶剂移除包埋介质,通常为固体石蜡。然后将切片通过分级醇溶液,降低浓度并置于水中对切片补水。


在下一步中,将切片浸入苏木精溶液中,对细胞核进行染色。染色的强度取决于组织类型、切片厚度、浸泡时间等因素。观察玻片的病理学家的偏好也有影响。用水冲洗后,用蓝色染色液将苏木精的红染色变为蓝色。

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图3:图中显示了40倍放大倍率下十二指肠内的细胞核。它们使用苏木精染为蓝色。尽管组织内的细胞很密集,伊红产生的淡粉色染色依然能够显示组织内的皱褶和其它结构。


检查强度和背景染色

在显微镜下快速观察后,实验室技术员或病理学家便可判断染色是否充分或过度。如果染色不充分,便需要在苏木精中再次浸染。如果染色浓度过强,切片显示背景染色,他们会使用酸性溶液淡化染色,实现切片染色的差异化。这一步骤后,需要再次使用蓝色染液并在自来水下冲洗。


下一步是伊红染色。伊红是苏木精的复染剂,可差异化地染出红细胞、胶原,并通过粉色展现出平滑肌。分化同样需要根据组织的情况用水洗去过量的伊红。然后将染色后的玻片浸入梯度乙醇中,再浸入二甲苯,对玻片脱水。完成染色和脱水后,使用封片剂来封装切片。



何时检查染色

究竟是在苏木精染色后在显微镜下检查染色和分化,还是在伊红染色后,不同的方案做法也不同。在苏木精染色后检查,无论是再次浸染还是重复分化,都方便立即调整。在伊红染色后检查,可以让实验室技术员或病理学家对全染色玻片有一个更好的了解。


快速检查在实验室工作流中具有重要的作用,可以确保负责诊断的病理学家看到需要的细节信息。



可见结构

使用明场照明可以观察H&E染色玻片。苏木精将细胞核染为蓝紫色,伊红将细胞质和结缔组织染为浅粉色。借助染色,病理学家可以轻松辨别不同的组织类型,例如肌肉或结缔组织,并发现切片中的畸形或不规则情况。这可以帮助它们识别反应特定的病理的变化,例如感染、慢性炎症或恶性肿瘤。借助可见信息,病理学家可以观察到组织内的结构变化,从而确定疾病的性质和进展

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图4:5倍放大倍率下的总览图显示了十二指肠中的三层组织:浆膜、粘膜下层和粘膜区域。每个区域对苏木精和伊红会有不同的反应,因此借助染料可以轻松辨别边界层。为识别潜在病灶,关键是要准确确定发生病理变化的确切组织部位和细胞类型。

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图5:40倍放大倍率下的十二指肠显示了粘膜下层和粘膜区域之间的边界。通过H&E染色,可以轻松辨别不同的细胞类型。一种细胞突破两个组织隔室之间的天然障碍,通常为癌症进展的一种常见指示。



颜色差异

染色工作流和诊断中使用的显微镜需要可以很好的辨别颜色差异,这对及时、准确的诊断至关重要。检查染色时,通常使用小尺寸的独立正置显微镜,因为实验室工作台一般都比较拥挤。


诊断使用的显微镜则应配置性能优异的相机,以便拍摄到报告和归档所需的细微的颜色差异。注释功能也有助于创建报告。如果您想了解更多关于适当临床显微镜的信息,可以阅读文章“如何选择临床显微镜"。



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